Криоконсервация наносит вред выживаемости и фертильности сперматозоидов из-за физического и химического стресса, оказываемого на клетки во время замораживания. Сперма жеребцов обладает низкой криоустойчивостью. Совершенствование протокола криоконсервации, включая состав разбавителя является актуальным. В данном исследовании проведен анализ использования двух разбавителей для центрифугирования и криоконсервации спермы жеребцов. Было проанализировано 27 эякулятов от 9 жеребцов. Анализ показал достоверное различия (Р<0,05) по оценке подвижности и числу клеток без повреждений после центрифугирования в разных разбавителях. Лучше оказался опытный разбавитель. Достоверных различий по количеству сперматозоидов с повреждениями хвоста, акросомы, ДНК и по уровню стимуляции дыхания 2,4 ДНФ не наблюдалось. Использование опытного разбавителя лучше сохраняло подвижность (Р<0,05), морфологию сперматозоидов (Р<0,01), акросомы (Р<0,05) и сопряженность дыхания и фосфорилирования (2,4 ДНФ тест) (Р<0,01) при выбранном протоколе криоконсервации спермы по сравнению с разбавителем ЛЦХЖ.